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微生物数量的测定ppt下载

素材编号:
375295
素材软件:
PowerPoint
素材格式:
.ppt
素材上传:
yangyiner
上传时间:
2019-09-25
素材大小:
1.12 MB
素材类别:
生物课件PPT
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微生物数量的测定ppt

微生物数量的测定ppt免费下载是由PPT宝藏(www.pptbz.com)会员yangyiner上传推荐的生物课件PPT, 更新时间为2019-09-25,素材编号375295。

这是微生物数量的测定ppt,包括了分类,微生物检验,琼脂培养基配方,菌落计数方法,培养基配方,伊红美蓝培养基,革兰氏染色等内容,欢迎点击下载。

第七章 微生物的测定
含在饮料的检测中
一、分类
碳酸饮料(品)(汽水)类
果汁(浆)及果汁饮料(品)类
蔬菜汁及蔬菜汁饮料(品)类
含乳饮料(品)类
植物蛋白饮料(品)类
瓶装饮用水类
茶饮料(品)类
固体饮料(品)类
特殊用途饮料(品)类
总酸度、pH值、还原糖含量
食品中微生物的检测
     细菌总数
     大肠菌群数
食品添加剂的检测
甜味剂-糖精钠、甜蜜素、安赛蜜、阿斯巴甜。
防腐剂-苯甲酸、山梨酸
二、微生物检验
1、细菌总数
菌落总数是指食品检样经过处理,在一定条件下培养后所得1g或1ml检样中所含细菌菌落的总数。它可以反应食品的新鲜度、被细菌污染的程度、生产过程中食品是否变质和食品生产的一般卫生状况等。因此它是判断食品卫生质量的重要依据之一。
流程
检样→做成几个适当倍数的稀释液→选择2-3个适宜稀释度各以1ml之量分别入灭菌平皿内→每皿内加入46℃适量营养琼脂→菌落数→报告
(1)样品的无菌处理
以无菌操作,将检样25g(或25ml)剪碎以后,放于含有225ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内预先置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内,经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液。
 固体检样在加入稀释液后,最好置灭菌均质器中以8000r/min~100000r/min的速度处理1min,做成1:10的均匀稀释液。
(2)稀释、接种
用1ml灭菌吸管吸取1:10稀释液1ml,沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液,下同),振摇试管混合均匀,做成1:100的稀释液。
琼脂培养基配方
蛋白胨    10 g  
牛肉膏     3 g  
氯化钠     5g  
琼脂       15-20g
蒸馏水     1000ml
根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计,选择2~3个适宜稀释度,分别在作10倍递增稀释的同时,即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内,每个稀释度作两个平皿。
稀释液移入平皿后,应及时将凉至46℃营养琼脂培养基[可放置在((46±1)0C)水浴锅内保温]注入平皿15ml,并转动平皿使混合均匀,同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液(不含样品)的灭菌平皿内作空白对照。
等琼脂凝固后,翻转平板,置(36±1)0C恒温箱内培养(48±2)h取出,计算平板内菌落数目乘以倍数,即得1g(1mL)样品所含菌落总数。
菌落计数方法
做平板菌落计数时,可用肉眼观查,必要时用放大镜检查,以防遗漏。在记下各平板的菌落数后,求出同稀释度的各平板平均菌落总数。
平板菌落数的选择
 选取菌落数在30~300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板,应采用两个平板平均数,其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数,若片状菌落不到平板的一半,而其余的一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。
稀释度的选择
应选择平均菌落数在30~300之间的稀释度,乘以稀释倍数报告之。若有两上稀释度,其生长的菌落数均在30~300之间,则视两者之比如何来决定。若其比值小于或等于2,应报告其平均数;若大于2则报告其中较小的数字。
    若所有稀释度平均菌落数均大于300,则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
    若所有稀释度的平均菌落数均小于30,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
    若所有稀释度均无菌落生长,则以小于1乘以最低稀释倍数报告之。
简便方法:菌落总数测定纸
使用方法
2、大肠菌群的测定
大肠菌群是指在37℃、24h能发酵乳糖,产酸、产气、需氧和兼性厌氧的革兰式阴性无芽孢杆菌。
大肠菌群数以每100ml(g)检样中大肠菌群最可能数(MPN)表示。
流程
乳糖胆盐发酵管变黄浑浊,
培养基配方
乳糖胆盐发酵双料:
(1)蛋白胨  40g
(2)牛胆盐  10g
(3)乳糖    20g
(4)蒸馏水  1000ml
(5)溴甲酚紫 (1.6g/t)   2ml
(6)PH值7.2 -7.4
乳糖发酵管
(1)蛋白胨  20g
(2)乳糖    10g
(3)蒸馏水  1000ml
(4)溴甲酚紫  (1.6g/t)       1ml
(5)PH值7.2 -7.4
伊红美蓝培养基:
成分:
蛋白胨       10g
乳糖        10g
磷酸氢二钾     2g
琼脂          17g
2%伊红水溶液    20ml
0.65%美蓝水溶液   13ml 
蒸馏水         1000ml
pH为7.1
制法:
  将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于热蒸馏水中,校正pH,分装于烧瓶内, 121℃高压灭菌15min备用。临用时加入乳糖并加热溶化琼脂,冷至50-55℃,加入伊红和美蓝溶液,摇匀,倾注平板。
伊红美兰琼脂平板划线培养大肠菌群的典型菌落
(1)深紫黑色,具有金属光泽的菌落
(2)紫黑色,不带或略带金属光泽的菌落
(3)淡紫红色、中心色较深的菌落。
革兰氏染色阴性菌
纸片法
MPN表
┌──────────────────┬─────┬─────┐
│       阴性管数                     │  MpN     │95%可信限│
├─────┬─────┬──────┤100 mL(g) ├──┬──┤
│1mL(g),*3│0.1mL(g)*3│0.0lmL(g)*3 │        │下限│上限│
├─────┼─────┼──────┼─────┼──┼──┤
│   0      │    0     │    0       │ <30     │<5│    │
│   0      │    0     │    1       │   30     │    │    │
│   0      │    0     │    2       │   30     │    │90  │
│   0      │    0     │    3       │   30     │    │    │
├─────┼─────┼──────┼─────┼──┼──┤
│   0      │    1     │    0       │   30     │<5│    │
│   0      │    1     │    1       │   60     │    │130 │
│   0      │    1     │    2       │   90     │    │    │
│   0      │    1     │    3       │   120    │    │    │
└─────┴─────┴──────┴─────┴──┴──┘
                                                               续表
┌───────────────────┬────┬─────┐
│      阳性管数                        │ MPN    │95%可信限│
├─────┬──────┬──────┤100mL(g)├──┬──┤
│1mL(g)×3 │0.l mL(g)x3 │0.0lmL(g)X3 │      │下限│上限│
├─────┼──────┼──────┼────┼──┼──┤
│    0     │      2     │    0       │   60   │    │    │
│    0     │      2     │    1       │   90   │    │    │
│    0     │      2     │    2       │  120   │    │    │
│    0     │      2     │    3       │  160   │    │    │
├─────┼──────┼──────┼────┼──┼──┤
│    0     │      3     │    0       │   90   │    │    │
│    0     │      3     │    1       │  130   │    │    │
│    0     │      3     │    2       │  160   │    │    │
│    0     │      3     │    3       │  190   │    │    │
├─────┼──────┼──────┼────┼──┼──┤
│    1     │      0     │    0       │   40   │<5 │200 │
│    1     │      0     │    1       │   70   │ 10 │210 │
│    1     │      0     │    2       │  110   │    │    │
│    1     │      0     │    3       │  150   │    │    │
├─────┼──────┼──────┼────┼──┼──┤
│    1     │      1     │    0       │   70   │10  │230 │
│    1     │      1     │    1       │  110   │ 30 │360 │
│    1     │      1     │    2       │  150   │    │    │
│    1     │      1     │    3       │  190   │    │    │
├─────┼──────┼──────┼────┼──┼──┤
│    1     │      2     │    0       │  110   │ 30 │360 │
│    1     │      2     │    1       │  150   │    │    │
│    1     │      2     │    2       │  200   │    │    │
│    1     │      2     │    3       │  240   │    │    │
├─────┼──────┼──────┼────┼──┼──┤
│    1     │      3     │    0       │  160   │    │    │
│    1     │      3     │    1       │  200   │    │    │
│    1     │      3     │    2       │  240   │    │    │
│    1     │      3     │    3       │  290   │    │    │
├─────┼──────┼──────┼────┼──┼──┤
│    2     │      0     │    0       │   90   │10  │360│
│    2     │      0     │    1       │  140   │ 30 │370 │
│    2     │      0     │    2       │  200   │    │    │
│    2     │      0     │    3       │  260   │    │    │
├─────┼──────┼──────┼────┼──┼──┤
│    2     │      1     │    0       │  150   │ 30 │440│
│    2     │      1     │    1       │  200   │ 70 │890│
│    2     │      1     │    2       │  270   │    │    │
│    2     │      1     │    3       │  34o   │    │    │
└─────┴──────┴──────┴────┴──┴──┘
革兰氏染色
革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤,具体操作方法是: 1)涂片固定。 2)草酸铵结晶紫染1分钟。 3)自来水冲洗。 4)加碘液覆盖涂面染1分钟。 5)水洗,用吸水纸吸去水分。 6)加95%酒精数滴,并轻轻摇动进行脱色,30秒后水洗,吸去水分。 7)蕃红梁色液(稀)染10秒钟后,自来水冲洗。干燥,镜检。 染色的结果,革兰氏正反应菌体都呈紫色,负反应菌体都呈红色。
分光光度计使用方法
2.使用方法
(1)预热仪器  将选择开关置于“T”,打开电源开关,使仪器预热20分钟。为了防止光电管疲劳,不要连续光照,预热仪器时和不测定时应将试样室盖打开,使光路切断。
(2)选定波长  根据实验要求,转动波长手轮,调至所需要的单色波长。
(3)固定灵敏度档  使用时,调到“1”挡。
(4)调节T=0%  轻轻旋动“0%”旋钮,使数字显示为“00.0”,(此时试样室是打开的)。
(5)调节T=100%  将盛蒸馏水(或空白溶液,或纯溶剂)的比色皿放入比色皿座架中的第一格内,并对准光路,把试样室盖子轻轻盖上,调节透过率“100%”旋钮,使数字显示正好为“100.0”。
(6)吸光度的测定  将选择开关置于“A”,盖上试样室盖子,将空白液置于光路中,调节吸光度调节旋钮,使数字显示为“.000”。将盛有待测溶液的比色皿放入比色皿座架中的其它格内,盖上试样室盖,轻轻拉动试样架拉手,使待测溶液进入光路,此时数字显示值即为该待测溶液的吸光度值。读数后,打开试样室盖,切断光路。
重复上述测定操作1-2次,读取相应的吸光度值,取平均值。
(8)关机  实验完毕,切断电源,将比色皿取出洗净,并将比色皿座架用软纸擦净。
3.注意事项
(1)为了防止光电管疲劳,不测定时必须将试样室盖打开,使光路切断,以延长光电管的使用寿命。
(2)取拿比色皿时,手指只能捏住比色皿的毛玻璃面,而不能碰比色皿的光学表面。
(3)比色皿不能用碱溶液或氧化性强的洗涤液洗涤,也不能用毛刷清洗。比色皿外壁附着的水或溶液应用擦镜纸或细而软的吸水纸吸干,不要擦拭,以免损伤它的光学表面。
 

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